Abstrato

A selecção de genes de referência para uma comparação da biossíntese de flavóides de L. confusa e L. japonica

Qiao-cheng MO, Mu-xiu TAN, Dan-na HUANG, Feng-hua SHI*

a estabilidade de 8 genes de referência candidatos em 4 tecidos de L. confusa e L. japonica foi avaliada utilizando quatro algoritmos para avaliar a validade dos genes de referência para a sua utilização na normalização precisa dos dados de qRTPCR. Os 8 genes de referência candidatos são β-TUB, eIF-4a, ACT11, eEF-1α, GAPDH, UBQ10, 18S e 25S, e os 4 tecidos eram folhas, botões verdes, botões brancos e flores brancas. Os resultados mostraram que os genes mais estáveis ??selecionados pelos quatro algoritmos destes 8 genes são ligeiramente diferentes para estes tecidos, mas os genes menos estáveis ??foram os mesmos em cada caso. O ACT11, o eIF-4a e o β-TUB são os três genes mais estáveis ??selecionados pelo geNorm, o β-TUB é o mais estável avaliado pelo Delta CT e Normfinder, e o GAPDH pelo Bestkeeper. 18S e 25S foram os dois genes menos estáveis, tal como avaliado por todos os quatro algoritmos. Para verificar a validade destes genes seleccionados pelos quatro métodos, o nível de expressão comparativo do gene FSⅡ nestes 8 tecidos foi normalizado com os mesmos. Foram observados perfis de expressão semelhantes de FSⅡ com os genes mais estáveis ??selecionados pelos quatro métodos e o mais elevado foi encontrado nas folhas e o mais baixo nas flores de L. confusa. Mas aparentemente são diferentes dos perfis quando submetidos a normalização pelos menos dois genes estáveis: 18S e 25S. Isto demonstrou que os genes de referência aporativos são indispensáveis ??para ensaios de perfil genético, e estes genes recomendados pelos quatro algoritmos são todos fiáveis. Este é o primeiro relatório sobre a seleção de genes candidatos de referência em espécies de Lonicera e fornecerá uma comparação mais precisa da expressão genética na via de biossíntese de flavoides entre L. confunde e L. japonica.