Abstrato

Replicação e tradução de genes do vírus da hepatite B introduzidos pelo esperma em células embrionárias

Qiu-Ju Zhang, Ying Zhong, Ji-Hua Huang, Qing-Dong Xie, Xiao-Fang Tan, Chen-Yao Zhong, Lan Xu, Tian-Hua Huang

Objectivo: Dado que o vírus da hepatite B (HBV) pode infectar espermatozóides humanos e que os genes do HBV introduzidos pelos espermatozóides podem ser transcritos em embriões em desenvolvimento, procurámos confirmar a presença de antigénios maduros do HBV e avaliar o mecanismo de replicação dos genes viral em células embrionárias. Métodos: O esperma humano foi transfectado com os plasmídeos recombinantes pIRES2-EGFP-HBs ou pIRES2-EGFP-HBc e foi depois utilizado para fertilizar óvulos de hamster dourado livres de zona. Os embriões bicelulares com e sem fluorescência verde foram recolhidos para deteção de ADN ou proteína do VHB por hibridização fluorescente in situ (FISH), ensaio de imunofluorescência (IA) e ensaio imunoenzimático (ELISA). Resultados: 1. Foram observados sinais FISH positivos para HBs e HBc-DNA nos núcleos dos espermatozóides e nos núcleos dos embriões bicelulares nas amostras de teste, mas não foram detectados nos controlos. 2. Foram detectados sinais IA positivos para HBsAg ou HBcAg no citoplasma dos embriões bicelulares nas amostras de teste, mas não nos controlos. 3.Com recurso a ELISA, o nível de AgHBs num único embrião bicelular foi de 0,064 ng/ml. Da mesma forma, o HBcAg foi detetado no grupo experimental de cinco embriões. Conclusão: Os genes HBV S ou C introduzidos no esperma foram capazes de replicar concomitantemente o genoma do embrião hospedeiro através de um modo semiconservador de replicação do ADN e foram capazes de expressar proteínas virais nas células embrionárias.