Abstrato

Construção de vetor de RNA de interferência estável e de alta eficiência para Penicillium sp.

Haizhao Xue, Yibo Hu, Xiaoran Fang, Guangshan Yao, Xin Song

A interferência por RNA (RNAi), que pode diminuir a expressão genética de forma eficaz e específica, tem mostrado um grande potencial na investigação da função genética e na modificação genética. Neste estudo foi construído um vetor de interferência de RNA pHX-RNAi, que transporta uma cassete de resistência à higromicina e uma unidade transcricional para a expressão de RNA em gancho . Um gene amy15A que codifica a principal amilase numa estirpe Penicillium oxalicum A11 com alto teor de celulase foi alvo de abate. Os resultados de SDS-PAGE e RT-qPCR mostraram que tanto os níveis de transcrição como de secreção de Amy15A foram dramaticamente regulados negativamente, o que implica que o RNAi desempenha um papel significativo na regulação da expressão genética pós-transcricionalmente. Todos os transformantes resistentes à higromicina com as construções de silenciamento apresentaram um elevado grau de silenciamento na expressão de amy15A. Considerando o conservadorismo da maquinaria RNAi nos fungos, o vetor RNAi estabelecido neste estudo - pHX-RNAi poderá ser aplicado a outros fungos filamentosos.