Abstrato

Seleção em todo o genoma e teste de genes de referência superiores para normalização quantitativa da expressão genética no tabaco (Nicotiana tabacum)

Yushuang Guo, Ruiyuan Li, Zeshan Asgher, Imran Haider Shamsi, Shizhou Yu, Jiehong Zhao e Xueliang Ren

O qRT-PCR é uma ferramenta muito precisa para medir a expressão genética em todos os organismos. Os resultados de qRT-PCR precisos e reprodutíveis dependem da normalização dos dados de expressão utilizando genes de referência fiáveis. Para diversificar o conjunto de genes de referência fiáveis ??no tabaco, a estabilidade de expressão de 44.873 genes do tabaco (ESTs) foi medida utilizando um microarranjo personalizado num conjunto diversificado de 21 amostras, representando vários tipos de tecidos e fases de desenvolvimento. Um total de 14 genes foram selecionados como genes candidatos de referência porque pareciam ser os mais estáveis. Estes genes foram comparados com dois genes de limpeza amplamente utilizados (L25 e EF-1a) para posterior validação por qRT-PCR. Os resultados mostraram que o Gene 3 (NADH desidrogenase) e o Gene 4 (acompanhante CPN60-2) exibiram a maior estabilidade de expressão e foram ainda mais estáveis ??do que o L25 e o EF-1a. Em conjunto, os nossos resultados fornecem um conjunto mais amplo de genes de referência estáveis ??para a análise da expressão genética do tabaco.