Abstrato

Expressão da Proteína Principal do Capsídeo do Parvovírus Cainina por Levedura (Pichia pastoris) e Purificação Eficiente Utilizando Arginina em Cromatografia de Afinidade

Ying He, Qiumei Shi, Sumin Pan, Cairan Yang, Yanying Zhang e Xinhua Shao

Foi desenvolvido um ensaio imunocromatográfico (IC) para a deteção rápida de parvovírus canino utilizando anticorpos monoclonais (McAbs) contra o parvovírus canino (CPV-2). Para preparar os McAbs, o gene que codifica a proteína VP2 do CPV-2a foi expresso num vector de expressão de Pichia pastoris pPICZ-A. A VP2 recombinante tinha uma função antigénica semelhante à proteína da cápside nativa, como demonstrado por Western blotting utilizando anti-soro policlonal CPV-2. Os McAbs contra o CPV-2 foram produzidos pela fusão da linha celular de mieloma SP2/0 com células do baço de ratinhos Balb/C imunizados com proteína VP2 recombinante purificada. Por ELISA foi demonstrado que os McAbs reconheceram especificamente os epítopos VP2 do CPV-2, mas não os de outros vírus caninos, tais como o vírus da esgana canina (CDV) ou o adenovírus canino (CAV). Um ensaio de IC desenvolvido com os McAbs foi adequado para a deteção rápida de parvovírus canino. Amostras fecais (120) de cães suspeitos de infecção por CPV-2 foram analisadas tanto pelo ensaio de hemaglutinação (HA) como pelo ensaio IC, e 52 e 53 amostras foram consideradas positivas para CPV-2, respectivamente. A comparação entre os dois ensaios diferentes revelou que o ensaio IC é tão sensível como o HA; a sensibilidade e a especificidade do ensaio IC são de 98,6% e 98,1%, respetivamente.