Abstrato

Isolamento Eficiente e Análise Funcional de Mutantes Insensíveis a Bacteriófagos Espontâneos de Streptococcus thermophilus

Chengjie Ma, Jinzhong Lin, Guangyu Gong, Zhenmin Liu, Zhengjun Chen, Aimin Ma

A utilização de estirpes resistentes aos bacteriófagos e com propriedades tecnológicas satisfatórias é essencial para a prevenção de infecções fágicas em processos fermentativos industriais . Aqui, descrevemos um método melhorado para o isolamento de mutantes insensíveis a bacteriófagos espontâneos de Streptococcus thermophilus (BIMs). A concentração de grandes volumes de culturas secundárias de S. thermophilus, a sua subcultura em leite desnatado com elevados títulos de bacteriófagos e a sua inoculação com o fenótipo de rápida acidificação do leite em múltiplas passagens foram fundamentais para aumentar a probabilidade de obtenção de mutantes, melhorar a eficiência do isolamento e mantendo o desempenho tecnológico. Obtivemos grandes quantidades de BIMs após cada ronda de triagem, com uma eficiência de isolamento superior a 85%. Analisámos nove BIMs, e todos eles eram semelhantes à estirpe parental S. thermophilus St1 no que diz respeito à sinérese, capacidade de retenção de água e viscosidade aparente. Em comparação com a estirpe parental, sete das nove variantes possuíam atividades acidificantes equivalentes, sendo que as restantes duas variantes exibiram um excelente desempenho de acidificação. Um ou dois novos espaçadores de fagos correspondentes foram encontrados em todos os nove BIMs, demonstrando que o sistema CRISPR/Cas foi responsável pela resistência aos fagos de S. thermophilus.