Abstrato

Clonagem e análise da expressão de Vv-lac3, um novo gene funcional da lacase envolvido no alongamento do estipe, com base na sequência genómica de Volvariella volvacea

Yuanping Lu, Guangmei Wu, Lingdan Lian, Lixian Guo, Zhiyun Yang, Wei Wang, Binzhi Chen, Baogui Xie

As lacases fúngicas desempenham sempre papéis importantes em vários processos fisiológicos e de desenvolvimento. Aqui, clonámos um gene lacase e nomeámos Vv-lac3, cDNA de Volvariella volvacea, e expressámos o cDNA em Pichia pastoris. O cDNA de Vv-lac3 era constituído por 1599 pb contendo um open reading frame (ORF) que codifica 532 aminoácidos. A análise dos aminoácidos deduzidos revelou que o Vv-lac3 possuía um péptido sinal de 19 aminoácidos na extremidade N-terminal e uma proteína madura de 513 aminoácidos. O Vv-lac3 continha quatro sítios conservados de ligação ao cobre, que é a estrutura típica das lacases fúngicas. A análise filogenética mostrou que o Vv-lac3 apresentava um elevado grau de identidade com outras lacases de basidiomicetos. A análise Native-PAGE e SDS-PAGE demonstrou que o produto do cDNA de Vvlac3 de P. pastoris era uma lacase funcional com uma massa molecular de 65 kDa. A expressão do gene Vv-lac3 em V. volvacea aumentou durante a fase de botão até à fase de alongamento; atingiu o pico na fase de alongamento e depois diminuiu na fase de maturação, o que sugere que este gene desempenha um papel regulador no alongamento do estipe em V. volvacea.