Abstrato

Um novo método de PCR em tempo real com transcriptase reversa para a quantificação de Vibrio Parahemolyticus viável em camarão cru com base numa construção rápida do método de curva padrão

Mengtong Jin, Haiquan Liu, Wenshuo Sun, Qin Li, Zhaohuan Zhang, Jibing Li, Yingjie Pan, Yong Zhao

O Vibrio parahemolyticus é um importante agente patogénico que causa doenças associadas associadas ao marisco. Portanto, são métodos necessários rápidos e fiáveis ??para detetar e quantificar o total viável de V. parahaemolyticus em produtos do mar. Neste ensaio foi desenvolvido um PCR de transcriptase reversa em tempo real baseado em RNA (RT-qPCR) sem uma etapa de enriquecimento para deteção e quantificação do total viável de V. parahaemolyticus em camarão. Os padrões de RNA como segmentos alvo foram sintetizados in vitro com a RNA polimerase T7 e posteriormente convertidos em cDNA para estabelecer uma curva padrão para quantificar o V. parahaemolyticus. A eficiência da ocorrência foi de 94,56% e situou-se dentro do intervalo aceitável. Sem pré-enriquecimento, a sensibilidade do RT-qPCR na quantificação de V. parahaemolyticus em camarão foi de 58 ufc/g, aproximadamente. Além disso, a sobrevivência de V. parahaemolyticus em amostras de camarão fortificado foi quantificada por RT-qPCR, qPCR baseado em ADN e método padrão de contagem de placas. Os resultados da quantificação do RT-qPCR mostraram uma boa estatística estatística (R2=0,96) quando comparados com o método padrão de contagem de placas. No entanto, o coeficiente de demonstração entre o método de contagem de placas e o qPCR baseado em ADN foi de apenas 0,85 para quantificar o V. parahaemolyticus. Com base nos resultados, este novo método pode ser uma forma eficaz de fornecer dados quantitativos fiáveis ??sobre o V. parahaemolyticus viável em camarões.