Abstrato

Rizosecreção do peptídeo antimicrobiano recombinante ranalexina de raízes peludas de tabaco transgénico

Rasha Abou Aleinein, Holger Schäfer, Michael Wink

A rizosecreção de proteínas recombinantes funcionais de raízes cultivadas in vitro no meio hidropónico oferece uma tecnologia atraente para simplificar os procedimentos de purificação a jusante. O objetivo do presente estudo foi a produção e secreção do peptídeo antimicrobiano (AMP) ranalexina a partir de raízes peludas de Nicotiana tabacum que foram transformadas por agroinfeção. Uma ranalexina marcada com His foi expressa sob o controlo do promotor CaMV 35S e dirigida para a via de secreção da planta através da fusão do seu terminal N ao péptido sinal do RE da calreticulina. A acumulação máxima de ranalexina no tecido da raiz pilosa após 20-25 dias de cultura representou cerca de 3,36% da proteína solúvel total. A ranalexina secretada atingiu uma concentração de 0,28 mg/L no meio no dia 25. O nível extracelular de ranalexina pode ser aumentado para 1,64 mg/L pela adição de polivinilpirrolidona ao meio de cultura. A ranalexina secretada é ativa contra bactérias Gram positivas e Gram negativas, incluindo estirpes que são multirresistentes a antibióticos, como Staphylococcus aureus MRSA resistente à meticilina, Enterococcus VRE resistente à vancomicina, Streptococcus pyogenes, Escherichia coli, Acinetobacter baumanii, bem como isolados clínicos de MRSA . Os nossos resultados demonstram a utilidade das culturas de tecidos vegetais, especialmente das raízes peludas do tabaco, como sistema alternativo de produção de ranalexina e outros peptídeos antimicrobianos.