Abstrato

Identificação e Quantificação de Tilletia caries e T. controversa em Amostras de Sementes e Discriminação das Duas Espécies

Zgraja G, Kramer S, Jonitz A e Wagner W

O bolo fedorento ou comum, causado pela cárie de Tilletia, e o bolo anão do trigo, causado por T. controversa Kühn, são as principais doenças transmitidas por sementes em cereais e espécies de pastagens (Graminaceae). Os níveis de contaminação são controlados de forma rotineira pelos organismos de certificação ou laboratórios oficiais de controlo. Relatamos vários ensaios de PCR que foram desenvolvidos para a identificação e quantificação de Tilletia spp. em amostras contaminadas de trigo e espelta. Um segmento de 140 pb da região ITS é amplificado com PCR qualitativa para fins de rastreio ou com PCR em tempo real para quantificação. O método foi validado com sucesso tanto internamente como num teste de proficiência em comparação com outros métodos estabelecidos. Além disso, foi desenvolvido um PCR-RFLP para discriminação de espécies. Utilizando HinfI como endonuclease de restrição, a sequência PRB2 de T. caries é digerida em três fragmentos, enquanto que existem apenas dois em T. controversa. Nas análises de rotina e na monitorização de lotes de sementes ou matérias-primas para alimentação animal, esta abordagem de PCR é uma alternativa adequada aos métodos microscópicos tradicionais, demorados e trabalhosos.