Daniel M. Barry
Após a variedade de organismos não desenvolvidos de animais domesticados entregues in vivo, são normalmente avaliados sob alta amplificação (pelo menos 80X) com a guia de uma lente de aumento transformada ou de um sistema de som. Os organismos não desenvolvidos de Grau 1 darão os melhores resultados de originação quando movidos para sincronizar as criaturas fêmeas beneficiárias, enquanto os organismos incipientes de Grau 3 darão os resultados mais visivelmente terríveis. O objetivo do exame atual foi cultivar cada uma das três avaliações de qualidade de organismos incipientes em estádio de mórula pré-compactados entregues in vivo de ovinos, caprinos e animais leiteiros em dois meios de cultura distintos e depois pensar na melhoria dos organismos não desenvolvidos por meio de avaliar a quantidade de organismos subdesenvolvidos que atingem o estádio de blastocisto produzido. Os resultados indicaram que não houve contrastes críticos entre a melhoria dos organismos não desenvolvidos de Grau 1 e Grau 2 de qualquer uma das três espécies quando refinados em TCM-199 ou inativados pelo calor no início da fase de gravidez (<60 d) ox- como líquido amniótico (BAF) como meio de cultura. Fundamentalmente mais organismos incipientes de ovinos, caprinos e bovinos pré-compactados de grau 3 criados in vivo, em qualquer caso, criados até à fase de blastocisto incubado quando refinados em BAF com 10% de SFB e agentes anti-infecciosos, em contraste com a cultura em MTC -199 com 10% de SFB e antimicrobianos (p<0,05). Materiais e Métodos Cultura celular: Os OLGs foram separados do cérebro de ovelhas com 4 a meio ano de idade, como já foi ilustrado. As células recentemente confinadas, banda III (ver Szuchet et al., 1980, para subtilezas) foram plaqueadas em placas de cultura de plástico a 2 x 106 células/ml. Aproximadamente 40% das células ligadas à placa; o resto das células emoldurava pequenos cachos desnatados. Estes últimos são referidos como B3.f OLG (Szuchet e Yim, 1984). Após 4-5 dias, o sobrenadante contendo B3.f OLG foi recolhido e centrifugado. As células do sedimento foram ressuspensas em meio de cultura e recolocadas em placas de petri revestidas com polilisina, no exterior das quais o OLG se ligou. As últimas células são designadas por B3 fA (A de seguidor). B3. Os fA OLG foram mantidos em meio de Eagles alterado de Dulbecco, melhorado com 20% de soro de pónei, 2 mM de glutamina e antitoxina (0,3 kg/ml de anfotericina B e 2,4 g/ml de garamicina). As sociedades eram atendidas duas vezes por semana. A imaculação da cultura foi determinada em 98-99% utilizando uma resposta imunitária monoclonal contra a galactocerebrosídeo (uma bênção do Dr. B. Ranscht), assim como uma resposta imunitária policlonal contra a 2',3'- nucleótido cíclico 3'-fosfohidrolase (uma bênção do Dr. T. Polvilhe). As células foram testadas 2-1 4 dias após a ligação. Fluxos de células inteiras Batidas de tensão positiva do potencial de retenção (-80 mV) ativaram uma corrente de saída subordinada à tensão e ao tempo em OLGs refinados. Os registos de tensão de célula inteira de um OLG após 4 dias em cultura de discípulos podem ser encontrados na Figura 2.A parte transitória da corrente foi inativada na capacidade de retenção despolarizada de -40 mV, deixando um segmento de estado consistente de suficiência variável (Fig. 2B). A Figura 2C mostra a relação corrente-tensão de pico para os fluxos delineados na Figura 2, An e B. Em suma, a ligação corrente-tensão para a corrente transitória ou de pico manteve-se consistente com o tempo após a fundação de todo o arranjo celular, permitindo 3-5 min para o ajuste introdutório. A seletividade iónica do segmento transitório da corrente de saída foi resolvida a partir da inversão dos fluxos de cauda à vista de 5,4 mM fora do K+. O potencial do filme foi primeiro alterado para 120 mV durante 10 ms (Fig. 3A) e depois voltou a diferentes possibilidades de teste. A relação corrente-tensão momentânea (5 ms após o início dos fluxos de cauda) mostra que o potencial de inversão foi de -66,2 f 1,45 mV (4). O potencial de inversão determinado para canais impecavelmente particulares de K+ é de -82 mV. Expandindo o [K], de 5,4 para 35 mM K+ deslocou o potencial de inversão para -19,8 mV (2). condutância tem origem nas investigações de fluxos OLG em diversas ocasiões na cultura. No prazo de 48 horas de galvanização, a B3.fA OLG começou a criar procedimentos e a expressar fluxos de saída dependentes da voltagem. Após várias semanas em cultura, o segmento transitório da corrente de saída parecia diminuído. Esta diminuição foi frequentemente acompanhada por uma expansão no estado consistente ou no segmento não inativador da corrente de saída. Além disso, houve uma expansão na corrente do retificador interno como aparece na Figura 9. Numa progressão de 85 exames, verificámos que 88% (30/34) das células com formas após o dia 7 da cultura seguidora cresceram retificador interno contrastado e 18 % (5/28) de células nos dias 1-3 e 26% (6/23) nos dias 4-7. A distinção na recorrência do retificador interno nas células antes do dia 7 e após o dia 7 na cultura de discípulos foi excecionalmente grande (p <0,001 conforme controlado pela investigação x2). Curiosamente, 57% (4/7) das poucas células que permaneceram sem forma após catorze dias em cultura exibiram filmes rectos de alta obstrução. As propriedades eletrofisiológicas dos OLGs foram inspecionadas com toda a configuração da célula da estratégia de fixação de voltagem do ânodo fixo. As análises neste exame mostram a presença de uma corrente externa subordinada à tensão e de uma corrente retificadora interna que são particulares de K+. A corrente de saída dependente da voltagem fala provavelmente de uma reação composta por 2 condutâncias separadas. Este surge de forma diferente em relação aos relatos de Bevan e Raff (1985) e Bevan et al. (1986), que não descobriram condutâncias subordinadas à tensão em OLGs. Kettenmann et al. (1984a) observaram uma pequena dependência da voltagem nas suas investigações de canal único de OLGs (a variação normal do PO foi de 0,08 f 0,04 por passo de 10 mV).Não pudemos apresentar um trabalho para o Caz+ no início dos fluxos de K+ uma vez que (1) o bloqueador da corrente de cálcio cádmio não teve impacto (Brown e Griffith, 1983; Galvan e Sedlmeir, 1984; Beluzzi et al., 1985b).daniel.barry@univen.ac.za
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