Archita Ghoshal e Siddhartha Sankar Ghosh
A via Wnt é um aspeto crítico na complexa rede de moléculas sinalizadoras implicadas no cancro. Nas células não malignas, a cascata de sinal Wnt é bloqueada pelas proteínas secretadas relacionadas com o Frizzled (sFRPs), uma família de glicoproteínas. No entanto, são silenciados epigeneticamente nas células cancerígenas. Neste estudo, tentámos administrar sFRP1 humano recombinante purificado a partir de cultura bacteriana em células de cancro cervical (HeLa) para determinar a sua atividade anticancerígena. O gene sFRP1 humano foi clonado no vetor de expressão bacteriana pGEX-4T2. A proteína recombinante foi sobre-expressa como corpos de inclusão em E. coli BL21 (DE3). Após otimização do processo de solubilização das proteínas utilizando detergentes, o GST-sFRP1 foi purificado até à homogeneidade por cromatografia de afinidade com glutationa agarose. A análise MALDI verificou a assinatura peptídica particular do GST-sFRP1 e a integridade estrutural foi caracterizada por espectros de dicroísmo circular. Verificou-se que a proteína recombinante purificada exerce um efeito antiproliferativo significativo nas células HeLa em concentrações nanomolares. O western blotting com anticorpos contra a beta-catenina e a beta-catenina fosforilada confirmou a implicação da via canónica Wnt. A terapia combinada exibiu que a sFRP1 recombinante sensibilizou substancialmente as células HeLa em relação ao medicamento quimioterapêutico convencional cisplatina. O revestimento da proteína terapêutica sobre novas nanopartículas compostas incorporadas em nano-aglomerados de ouro facilitou a libertação sustentada da proteína e melhorou a sua atividade funcional. A notável propriedade de fluorescência dos nanoaglomerados de ouro foi explorada para fins de rastreio e geração de imagens. No geral, o nanossistema terapêutico baseado em sFRP1 pode revelar-se revolucionário no campo da teranóstica do cancro. A proteína 1 relacionada com o frizzled emitida (SFRP1) é um bloqueador característico da via de sinalização Wnt em células adultas comuns, mas é epigeneticamente silenciada em células de crescimento maligno, levando ao crescimento desviante. Neste exame, detalhamos novas nanopartículas compostas fabricadas com quitosana e alginato inseridos em nanopartículas de ouro, ligadas a sFRP1 recombinante humano comunicado por bactérias. A via Wnt, que é regulada positivamente na doença, foi explicitamente focada nas nanopartículas para alcançar um efeito antiproliferativo nas células de crescimento maligno, como é claro pelos níveis reduzidos de partículas a jusante, em particular, β-catenina, ciclina D1 e survivina. As nanopartículas potenciadas suportaram a chegada do sFRP1 fora das células, onde for prático. Além disso, as incríveis propriedades de iridescência dos nanoaglomerados de ouro foram abusadas para investigações oficiais, de geração de imagens e posteriores. O co-tratamento de nanopartículas empilhadas com sFRP1 com o fármaco cisplatina focou-se em duas vias livres para incitar a apoptose, como arquivado por estudos baseados em citometria de fluxo. De um modo geral, este nanossistema é promissor para acompanhar, gerar imagens e focar-se no movimento de crescimento maligno com proteína reparadora.A proteína 1 relacionada com o frisado secretada (SFRP1) é um bloqueador característico da via de sinalização Wnt nas células adultas comuns, mas é epigeneticamente silenciada nas células doentes, levando a uma multiplicação anormal. Neste exame, anunciamos novas nanopartículas compostas criadas com nanoaglomerados de ouro instalados quitosana e alginato, ligadas ao sFRP1 recombinante humano comunicado por bactérias. A via Wnt, que é regulada positivamente na malignidade, foi explicitamente focada com as nanopartículas para alcançar um efeito antiproliferativo nas células doentes, como é evidente a partir de níveis reduzidos de partículas a jusante, em particular, β-catenina, ciclina D1 e survivina . As nanopartículas permitiram a chegada contínua de sFRP1 para fora das células, onde for prático. Além disso, propriedades de brilho surpreendentes dos nanoaglomerados de ouro foram abusadas para investigações oficiais, de geração de imagens e posteriores. O co-tratamento de nanopartículas empilhadas com sFRP1 com o fármaco cisplatina focou-se em duas vias livres para ativar a apoptose, como relatado por estudos baseados em citometria de fluxo. De um modo geral, este nanossistema é promissor para monitorizar, gerar imagens e focar no movimento de crescimento maligno com proteínas úteis. Nas células não cancerígenas, os Wnts são obstruídos pelas proteínas relacionadas com o frizz (sFRPs) emitidas que são, em geral, reguladas negativamente nas células doentes. Refinámos e retratámos o SFRP4 marcado com glutationa S-transferase comunicado por bactérias a partir de um novo clone produzido a partir da raiz de células humanas. As células de malignidade cervical (HeLa) e de doença pulmonar (A549), nas quais as qualidades Wnt e relacionadas foram vistas como comunicadas, foram tratadas com o sFRP4 recombinante higienizado, que revelou uma porção crítica de obstáculo ao desenvolvimento celular subordinado de até 40%. O presente exame sobre a utilidade deste sFRP4 recombinante criado por bactérias na captura da multiplicação das células da doença é o primeiro do seu género, onde a captura do estádio G2/M e a apoptose precoce foram claras. O aumento da β-catenina fosforilada no tratamento com sFRP4 mostrou restrição da via Wnt, que foi adicionalmente afirmada pela regulação negativa das qualidades proliferativas geniais, como a ciclina D1 específica, c-myc e survivina. A ação prática do sFRP4 recombinante foi também abusada no módulo de co-tratamento com medicamentos quimioterapêuticos para destrinçar eventos atómicos. Em suma, a nossa investigação sobre o sFRP4 recombinante limpo de hospedeiro bacteriano oferece uma grande garantia de foco no movimento Wnt para investigar novos procedimentos para combater o crescimento maligno. Recentemente, dividimos a área genómica 8p11-12 para número duplicado e alterações articulares de qualidade num quadro de linhas celulares de doenças do seio humano e exemplos essenciais. Verificámos que a SFRP1 (proteína 1 relacionada com o frizzled secretada) é por vezes pouco comunicada, mesmo em tumores mamários com incrementos numéricos duplicados nesta localidade genómica.O SFRP 1 codifica um inimigo sinalizador WNT e desempenha um papel no desenvolvimento de vários tipos de tumores fortes. Neste estudo, quebrámos o silenciamento associado à metilação da qualidade do SFRP1 em células de crescimento maligno do seio com o amplicon 8p11-12 e explorámos as propriedades silenciadoras de tumores do SFRP1 em células com doenças do seio. A articulação do SFRP1 foi particularmente diminuída tanto nas linhas celulares de crescimento maligno do seio como nos exemplos de tumores essenciais em comparação com as células epiteliais mamárias humanas essenciais típicas, em qualquer caso, quando o SFRP1 é aumentado. A ocultação da articulação do SFRP1 nas células de crescimento maligno do seio com uma melhoria da qualidade do SFRP1 está associada à metilação do promotor do SFRP1. Além disso, a reconstrução da articulação SFRP1 sufocou o desenvolvimento de células de crescimento maligno do seio em monocamada e prejudicou o desenvolvimento autónomo. Da mesma forma, examinámos a ligação entre o silenciamento da qualidade SFRP1 e o movimento WNT no crescimento maligno dos seios. A articulação SFRP1 ectópica em células de crescimento maligno do seio sufocou as vias de sinalização WNT oficiais e não canónicas, e a articulação SFRP1 foi negativamente associada ao fluxo de saída de um subconjunto de qualidades responsivas a WNT, incluindo RET e MSX2. Neste sentido, a regulação negativa do SFRP1 pode ser ativada por eventos epigenéticos ou potencialmente hereditários e pode contribuir para a tumorigénese do crescimento maligno do seio humano através de vias de sinalização WNT padrão e não canónicas. © 2009 UICCA regulação negativa do SFRP1 pode ser ativada por eventos epigenéticos ou potencialmente hereditários e pode contribuir para a tumorigénese do crescimento maligno do seio humano através de vias de sinalização WNT padrão e não canónicas. © 2009 UICCA regulação negativa do SFRP1 pode ser ativada por eventos epigenéticos ou potencialmente hereditários e pode contribuir para a tumorigénese do crescimento maligno do seio humano através de vias de sinalização WNT padrão e não canónicas. © 2009 UICC
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