Abstrato

Autoimunidade 2017: Avaliação de um imunoensaio enzimático menos sensível e económico para estimar a soroincidência precoce do VIH - Vinay Khanna - Manipal University

 Vinay Khanna e Indira Bairy 

Enquadramento e Objectivo: Normalmente, os métodos moleculares, como a detecção de ARN viral ou de ADN proviral, são os métodos mais sensíveis para o diagnóstico precoce do VIH tipo 1; estes métodos envolvem tecnologias complexas e dispendiosas e, por isso, permaneceram em grande parte indisponíveis em ambientes com poucos recursos no mundo em desenvolvimento. Neste estudo, tentámos empregar um novo imunoensaio menos sensível para o VIH1 utilizando o método de avidez em conjunto com o imunoensaio enzimático sensível para diferenciar pessoas com infeções recentes e de longa data por VIH-1. Métodos: Este estudo foi realizado num centro de cuidados terciários no sul da Índia. Amostras consecutivas de soro (n=261) obtidas de doentes seropositivos para o VIH com mais de 15 anos de idade. Consentimento informado por escrito. Todos os casos de infecção por VIH-1 foram testados com ELISA padrão e confirmados por teste Western Blot. Estas amostras foram posteriormente testadas pelo método do índice de avidez e estudos de afinidade para distinguir os doentes com VIH-1 recente dos já estabelecidos. O índice de avidez ≤0,9 foi considerado como valor de corte para a infeção recente pelo VIH com duração do VIH inferior a 6 meses. Resultados: Dos 261 doentes, 26 doentes foram encontrados com um valor de teste de avidez inferior ou igual a 0,9 e foram classificados como seroconversores recentes com anticorpos a surgir no soro durante ≤6 meses e 235 doentes com um valor de avidez >0,9 foram colocados como longos casos de termo com anticorpos em circulação por >6 meses de duração. Dos 26 casos de infecção recente, um caso foi classificado erradamente como infectado recentemente através do método de imunoensaio de avidez, enquanto a história clínica sugeria infecção a longo prazo. Conclusões: O imunoensaio de índice de avidez foi desenvolvido por apresentar características de fácil desempenho, baixo custo, economia de tempo e não necessita de requisitos laboratoriais sofisticados. Esta técnica também pode ser realizada no campo para identificar infeções recentes, embora haja hipóteses de classificação incorreta em indivíduos que tiveram uma infeção de longa data. A identificação de infecções recentes com base na combinação de outros métodos necessita de mais investigação para reduzir os erros de classificação e descobrir a verdadeira incidência do VIH o mais cedo possível. Um imunoensaio é um teste bioquímico que quantifica a proximidade ou o agrupamento de uma macromolécula ou de uma pequena partícula numa solução utilizando um agente de ação contrária (na sua maioria) ou um antigénio (por vezes). O átomo identificado pelo imunoensaio é frequentemente referido como um “analito” e é na maioria das vezes uma proteína, apesar do facto de poder ser diferentes tipos de partículas, de vários tamanhos e tipos, desde que os anticorpos correctos que tenham as propriedades satisfatórias para a medida são criados. Os analitos em fluidos orgânicos, como o soro ou o xixi, são na maioria das vezes estimados através de imunoensaios para fins clínicos e de investigação. Os imunoensaios existem em diversas organizações e variedades.Os imunoensaios podem ser realizados de várias formas, sendo os reagentes incluídos e lavados ou isolados em vários pontos do teste. Os testes de múltiplas etapas são regularmente designados por imunoensaios de partição ou imunoensaios heterogéneos. Alguns imunoensaios podem ser realizados essencialmente misturando os reagentes e o teste e fazendo uma estimativa física. Tais medidas são designadas por imunoensaios homogéneos ou, menos habitualmente, por imunoensaios sem descolamento. A utilização de um calibrador é regularmente utilizada em imunoensaios. Os calibradores são arranjos que contêm o analito a que se refere, sendo vulgarmente conhecida a convergência deste analito. O exame da reação de uma medição a um exemplo genuíno em relação à reação de teste criada pelos calibradores torna concebível decifrar a qualidade do sinal no que diz respeito à proximidade ou agrupamento do analito no exemplo. Os imunoensaios dependem da capacidade de um agente de ação contrária perceber e ligar uma macromolécula específica no que pode ser uma mistura desconcertante de macromoléculas. Em imunologia, a macromolécula específica limitada por um neutralizador é designada por antigénio e a região de um antigénio à qual o agente de ação contrária se liga é designada por epítopo. Por vezes, um imunoensaio pode utilizar um antigénio para identificar a proximidade de anticorpos, que percecionam esse antigénio, numa resposta. No final do dia, em certos imunoensaios, o analito pode ser um neutralizador, em oposição a um antigénio. Não obstante o oficial de um agente de ação contrária ao seu antigénio, o outro componente chave de todos os imunoensaios é uma forma de fornecer um sinal quantificável por causa da autoridade. A maioria, mas não todos, dos imunoensaios inclui anticorpos ou antigénios que se ligam sinteticamente com um nome percetível. Existe um enorme número de marcas nos imunoensaios atuais e têm em conta o reconhecimento através de vários métodos. Numerosas marcas são percetíveis porque emanam radiação, produzem uma alteração de sombreamento numa resposta, fluorescem sob a luz ou podem ser solicitadas a emitir luz. Os imunoensaios podem ser realizados em vários arranjos. Na sua maioria, um imunoensaio pode ser categorizado como uma das poucas classificações dependendo da forma como é executado. Imunoensaios sérios e homogéneos: Num imunoensaio sério e homogéneo, o analito não marcado num exemplo compete com o analito nomeado para ligar um imunizante. A medida do analito nomeado e não ligado é então estimada. Em princípio, quanto mais analito no exemplo, mais o analito nomeado é desenraizado e posteriormente estimado; subsequentemente, a medição do analito marcado e não ligado é relativa à medição do analito no exemplo. Os imunoensaios não competitivos de dois locais compreendem normalmente um analito "ensanduichado" entre dois anticorpos. Os ELISAs são frequentemente executados neste arranjo. Imunoensaios sérios e heterogéneos: Tal como num imunoensaio sério e homogéneo,num exemplo, o analito não marcado concorre com o analito marcado para vincular um agente de acção contrária. Nos testes heterogéneos, o analito nomeado e não ligado é isolado ou lavado, e o analito ligado e nomeado é estimado. Imunoensaios não competitivos de um único local: O analito obscuro do exemplo liga-se a anticorpos marcados. Os anticorpos marcados e não ligados são eliminados e os anticorpos nomeados ligados são estimados. O poder do sinal é diretamente relativo à medida do analito obscuro.