Abstrato

A adição de antibióticos aos meios de cultura de embriões provocou uma alteração na expressão de genes nas vias que governam a integridade do ADN em blastocistos de ratinhos

Yan Li1, Qianqian Han2, Xu Ji3, Lu Chang3, Wenjuan Li3, Jianfeng Shi2, Jing Liu3, Wuhua Ni1, Xuefeng Huang1, Chris O'Neill4, Xingliang Jin1,4*

Os antibióticos são componentes comuns dos meios de cultura de embriões e minimizam o risco de contaminação microbiana e infeção durante os procedimentos de Tecnologia de Reprodução Assistida (TARV). Os efeitos de dois antibióticos aminoglicosídeos (gentamicina, estreptomicina) e penicilina nos perfis globais de expressão génica (GE) foram avaliados por RNA-seq de blastocistos individuais de ratinhos. Os zigotos foram cultivados numa formulação de meio definido otimizado (KSOM) à qual foi adicionada uma gama de dosagem de cada antibiótico. Foi observado um atraso dose-dependente na taxa de desenvolvimento do zigoto para blastocisto morfologicamente normal e isto foi acompanhado por uma redução no número de células presentes nos blastocistos resultantes. Estes blastocistos exibiram a menor capacidade de crescimento adicional de 96 horas in vitro. A dose mais baixa de cada antibiótico testado (semelhante às concentrações utilizadas nos meios de qualidade clínica) provocou uma expressão diferencial significativa de aproximadamente 1.800 genes. Na maioria dos casos, o tratamento com antibióticos provocou uma redução da expressão genética e a análise da ontologia genética mostrou que os genes regulados negativamente foram enriquecidos para vários processos biológicos relacionados com a manutenção da integridade genómica. Todos os três antibióticos causaram a regulação negativa de Brca2, Blm, Rad51c e Rad54l, genes envolvidos em vias de recombinação homóloga do ADN e também vários genes dependentes de p53. Estudos de imunolocalização mostraram que cada antibiótico reduziu também o nível de BRCA2 e RAD51C detectados nos blastocistos. O presente estudo mostra que a suplementação de meios de cultura de embriões com antibióticos está associada a amplas alterações na expressão genética de uma forma que poderia potencialmente comprometer a integridade genómica dos embriões resultantes.